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蛋白质可用什么类型的分子生物试剂检测?

发布时间: 2023-03-09  点击次数: 316次
  分子生物试剂中的BCA蛋白浓度测定试剂是根据目前常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成,实现了蛋白浓度测定的简单,高稳定性,高灵敏度和高兼容性。BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween20,60,80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保EDTA低于10mM,无EGTA,二硫苏糖醇低于1mM,β-巯基乙醇低于1mM。
 
  此外,蛋白质还可用双缩脲试剂来检测。双缩脲试剂是一个用于鉴定蛋白质的分子生物试剂。它是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由0.1g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制,遇到蛋白质显紫色。
 
  双缩脲试剂本是用来检测双缩脲,由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。当底物中含有肽键时(多肽),试液中的铜与多肽配位,络合物呈紫色。可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。
 
  双缩脲试剂中真正起作用的是硫酸铜,而氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境,因此它可被其他碱,如氢氧化钠所代替。向试剂中加入碘化钾,会延长试剂的使用寿命。酒石酸钾钠的作用是保护反应生成的络离子不被析出变为沉淀,从而使试剂失效。