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ATCC细胞的具体计数操作教学

发布时间: 2021-06-17  点击次数: 38次
   当待测ATCC细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中的细胞的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。
  具体计数的操作如下:
  1.将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。
  2.将ATCC细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。
  3.计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算:
  细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104。
  说明:公式中除以4,因为计数了4个大格的细胞数。公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为:
  1.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm³,而1ml=1000mm³。
  注意:镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。
  ATCC细胞计数要点:
  1.进行细胞计数时,要求悬液中细胞数目不低于1×107 L-1,如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中。
  2.要求细胞悬液中的细胞分散良好,否则影响计数准确性。
  3.取样计数前,应充分混匀细胞悬液,尤其时多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀,以求计数准确。
  4.数细胞的原则是只数完整的细胞,若细胞聚集成团时,只按照1个细胞计算。如果细胞压在格线上时,则只计上线,不计下线,只计右线,不计左线。
  5.操作时,注意盖片下不能有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中,否则要重新计数。

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