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配对抗体的制备与筛选

发布时间: 2022-02-17  点击次数: 246次

配对抗体指的是可以同时结合在一个抗原分子上的两个抗体。配对抗体,一般应用于双抗夹心法 ELISA 实验。

抗体配对的原理

通常情况下,一个抗原分子拥有多个抗原决定簇,将抗原注射入动物体内进行免疫,针对不同的抗原决定簇会产生不同的抗体。产生的抗体具有特异性与专一性,即一个抗体分子只会特异性地结合一个抗原决定簇。两个针对不同抗原决定簇的抗体,有可能同时结合到抗原分子上。如果两个抗体同时结合到同一个抗原分子上,那么这两个抗体就是配对抗体。

配对抗体的制备与筛选

需要注意的是,即使两个抗体针对的是不同的抗原决定簇,也并不意味着这两个抗体分子一定可以同时与抗原分子结合。当一个抗体与抗原结合后,有可能会导致其他结合位点(抗原决定簇)构型的改变,从而导致其他的抗体无法正常结合到抗原上。位阻效应的存在,也可能使两个结合位点距离较近的抗体无法同时结合在抗原上。因此想要得到可以同时结合在抗原分子上的配对抗体,在制备出抗体后,还需要对得到的抗体进行筛选。这就意味着,要制备配对抗体,要完成以下两步工作:抗体的制备;配对抗体的筛选。

抗体制备

 为了便于后续的筛选,制备的抗体应为单克隆抗体,通常利用杂交瘤技术进行单克隆抗体的制备。 注意:如果单克隆抗体很少,很可能会找不到可以配对的抗体,因此,在免疫动物的时候,应多免疫几只动物,以获得更多的单克隆抗体。

配对抗体的筛选

通常,配对抗体筛选的方法是双抗夹心 ELISA 法。筛选的原理为:在得到了单克隆抗体后,从中取出两种单克隆抗体,一种作为捕获抗体,另一种作为标记抗体(HRP 酶标记),将捕获抗体包被在抗原板上,先加入抗原,孵育后洗去未结合的抗原,再加入标记抗体 孵育后洗去未结合的标记抗体,最后加入显色液显色。如果可以显色,说明标记抗体与抗原特异性结合,该捕获抗体与标记抗体为一对配对抗体。如果不能显色,说明标记抗体不能与抗原结合,从而被洗脱,该捕获抗体与标记抗体不是配对抗体。如果选择的两种单克隆抗体不能进行配对,则需重新选择两种单抗,重新进行试验,直至找出可以配对的抗体。

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 配对抗体的应用

利用双抗夹心法对目的抗原进行定性定量的检测,必须要用到可以同时与目的抗原结合的配对抗体。对于比较常见的目的抗原,可以通过购买试剂盒的方式得到相应配对抗体。但是市面上试剂盒的种类有限,有些目的蛋白在市面上无法买到对应的试剂盒,为了进行双抗夹心法 ELISA 实验,需进行相应的配对抗体的生产。


 


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