ELISA 实验常见问题原因分析及解决办法

高背景值？

可能原因是洗板不充分、读数时没有擦拭板底。

解决办法是检查洗板是否按要求进行，读数前擦拭板底，板底有手印或水渍导致值偏高

无信号值？

可能原因是试剂配制错误、标准品溶解后放置时间过久或反复冻融。

解决办法是检查是否存在试剂配制错误，避免溶解后的标准品重复使用，每次实验使用新的标准品

过强的信号值？

可能原因是streptavidin-hrp加样量过高。

解决办法是检查SA-HRP是否按要求的浓度配制

重复性差，可能原因是加样量不均一、加样时需悬空加样，避免划破包被面，引起抗体的损失

标准蛋白反应好，但样本未检测到信号？

可能原因是样本中目标蛋白浓度低、样本基质效应。

解决办法是使用阳性质控品对照测试和重复测试。至少将样本稀释1倍检测，并用回收测试确定基质效应是否消除，选择样本稀释后呈梯度下降的稀释倍数计算结果

标准蛋白反应好，但样本检测信号过高？

原因是样本目标蛋白量过高、样本存在非特异性反应酶。

解决办法是使用稀释液稀释样本，重复测试。选择样本稀释后呈梯度下降的稀释倍数计算结果。使用前确认样本是否存在特殊情况，并处理样本。

读数值过低？

可能原因是读数波长选择错误，显色时间过短。

解决办法是选择正确的主、 次波长读数。显色时间控制在15-25min最佳，不超过30min。

跳孔？

可能原因是洗板中不当操作、加样错误。

解决办法是洗板中不当操作，引起孔间的交叉污染。加样错误造成不符合预期的显色发生。