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ATCC细胞筛选时的常用技术讲解

发布时间: 2021-09-14  点击次数: 5次
   ATCC细胞的说明书中有关于细胞复苏和传代的详细步骤。除说明书外,还有另一份重要文件-COA(Certificate of Analysis)。COA中包含具体批次信息,如每管细胞的数量,建议复苏使用的培养基用量,已知细胞的传代代次等重要信息。
  部分培养基如DMEM,各厂商提供产品虽然名称相同,但成分也会有差异。为了保证细胞大的复苏率和维持细胞特性,建议购买细胞的时候,同时购买ATCC细胞的培养基。
  筛选ATCC细胞株的两种技术介绍:
  1.转染质粒后,单克隆方法筛选稳定细胞系
  对大多数细胞转染效率较低。对于基因过表达,如果转染效率达到40%,基因过表达尚可。但是对于基因干扰实验,对转染效率要求远远高于基因过表达,通常质粒转染无法满足。
  另外,质粒游离于细胞质中,很快降解,无法满足较长时间的检测项目;质粒转染整合几率极低,稳定细胞株构建耗时耗力,且得率很低,往往需要挑取单克隆株。
  2.病毒感染筛选稳定ATCC细胞株
  病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效,是目前主流的稳定细胞系筛选方法。用慢病毒制备稳转细胞株,由于其高效整合、高效转录、高效表达、宿主范围广,感染效率高,且与细胞染色体整合而不发生基因重排,是制备稳定细胞株的理想载体。
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