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判断血清质量的4种技巧

发布时间: 2023-07-03  点击次数: 279次

第一种:接种率测试

进行接种率测试可以优化出一个最合适的血清使用浓度。可以把新到批次的血清按不同的浓度比例配制成血清细胞培养基,例如5%、10%、15%和20%浓度的血清细胞培养基。然后以10-100个细胞/mL的浓度进行接种,并分别使用上述不同血清浓度的血清细胞培养基进行培养2周,观察细胞的不同浓度下的细胞存活率以及细胞集落的面积变化,从而得出一个最合适的血清浓度。

血清.png

例如,10%和15%的结果都可以接受的话,则应使用10%进行培养,一方面可以节省血清使用,其次也可以降低血清存在时对细胞生长产生的其他不可控影响因素。


第二种:生长曲线

从生长曲线可以判断不同批次间的血清对细胞生长的影响。以正常培养的浓度进行细胞接种,并观察记录细胞达到不同的密度所需要用到的时间。

血清1.png

例如,如果细胞使用这一批次的血清时,其生长停滞期的时间较长,说明细胞需要对这个批次的血清进行较长时间的适应后才能正常生长;如果细胞进入指数增长期后,倍增速度快,也就是长得很快,说明这批次的血清对细胞的生长促进效果很明显;如果细胞进入平台期后,其密度比以往的血清批次要更高,说明该批次的血清的经济效率更高,反之亦然。

可以直接用MTT绘制细胞的生长曲线,也可以用可连续观察的细胞计数仪或观测系统。


第三种:细胞特征观察

细胞特征观察用于判断该血清是否会存在一些影响因子,对细胞的基因表达产生影响。

这个实验对药物筛选、需要细胞定向分化或分泌物进行的项目非常有必要。

观察细胞特征,除了要对细胞的形态特征进行判断,还需要从分子和蛋白水平去检测对比。

例如在正常培养阶段,提取细胞RNA进行待研究的基因的表达分析,看看血清是否会对该基因的表达产生上调或抑制,如果有,那说明该血清的存在可能会影响你的课题实验的结果准确性。


第四种:血清污染物的检测

通常商业化的血清出厂前都会进行严格的微生物清除,但仍有极少数可能有部分的血清会存在支原体的污染,或在实验室进行血清分装时带入了微生物的污染。

因此,我建议,有条件的同学在使用血清前,应该先取一点血清或已配制完成的血清细胞培养基进行空白培养,观察其是否存在细菌、真菌等微生物的污染,确认没有问题后再进行正式的细胞培养。

血清2.png

而支原体污染的风险,则只能通过PCR、荧光染色等进一步的实验方法进行检测了。

这里还需要特别强调的一点是,有的同学会通过看血清的颜色是否红、橙红来判断血清质量,这是玄学,没有科学依据。

血清的颜色如果较红,代表其在采集过程中,动物出现了一定程度的溶血,这和采集工艺有关,和血清本身质量无关。

另外,血清解冻后,有时会看到有一些絮状物,这种絮状物也不一定是微生物污染,有可能是血清内的蛋白质凝集而成的。

它的存在可能对细胞产生刺激,不利于细胞生长,但血清还是可以用的,这些絮状物体积大无法通过过滤去除,我们可以尝试离心完成清除后继续使用该瓶血清。