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细胞冻存和复苏常见问题!

发布时间: 2023-12-05  点击次数: 229次

 

 

冻存细胞一般常用胎牛血清(FBS)和二甲基亚砜(DMSO)。血清是维持细胞生存环境;DMSO是冷冻保护剂,使细胞免受低温冰晶形成、及渗透压改变而导致的物理损伤;

细胞培养理论上基本建议的是两种:70%培养基 + 10%DMSO+ 20%胎牛血清或者10%DMSO+ 90%胎牛血清 。

但经过有些实验室经过对比发现:"10%的DMSO,90%的血清"复苏效果相对比"70%培养基 + 10%DMSO+ 20%血清"好。

 

 

DMSO产品咱就不多说了,什么品牌都有,只要是选择细胞培养级别的,效果应该差不多。不过我用的是MP Biomedicals二甲基亚砜(DMSO),效果还可以。

对于胎牛血清的选择就要相对谨慎了,市面上胎牛血清品牌可以说是鱼龙混杂,刚看过新闻的客户就会知道,高仿产品横行。慎重起见,给大家推荐CellMax品牌胎牛血清,目前有澳洲血清(库存紧张)和中国血源胎牛血清可供大家试用,购买。

 

 

细胞冻存和复苏需要注意哪些呢?

 

 

1、细胞本身的状态

一般情况下细胞的复苏还与原代细胞的活性有关,如果要冻存的细胞悬液本身活性不高的话,后面复苏的存活率也不高。

 

2、冻存细胞数量要足够

无论你再怎么小心,细胞在冷冻和复苏的时候都是最脆弱的,总会死掉一批。所以,一开始就要保证冻存细胞的数量足够。

 

3、慢冻快融

一般情况下,细胞冻存时要遵循“慢冻快融"的原则。标准的降温速度是1-2℃/min ,当温度到达-25℃,降温速度可加快至5-10℃/min,到-80℃可直接入液氮。有些实验室是梯度冻存:4度,-20,-80,液氮,依次冻存。而复苏速度越快越好。从液氮罐里取出来之后,迅速放在37°C水浴中,尽快融化

 

4、注意安全

细胞冻存和复苏是细胞培养技术里面最容易出事的部分。凡是和液氮接触的操作,注意戴保护眼镜和手套。注意:复苏的时候,在水浴中摇摇动的时候会有爆炸的可能性。另外, DMSO是有毒致癌的。接触的时候务必要带好手套。

 

5、做好标记

对于冻存细胞,一定要做好标记。如:细胞名称、代数和冻存日期。特别是公共实验室,更要做好标记,避免找不到自己的细胞。

 

6、DMSO是否去除

由于DMSO是一种有毒致癌物质。那么,解冻之后,应不应该去除冻存液中的DMSO呢?答案是no。除了极少数特别注明的对DMSO敏感的细胞外,99%的细胞都不需要去除DMSO。后面细胞培养中频繁换液会慢慢去除掉DMSO。