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原代细胞的常见问题 有哪些?

发布时间: 2024-01-03  点击次数: 162次
问:原代细胞和细胞系有什么区别?

答:原代细胞直接源自组织,一旦培养,原代细胞的寿命是有限的。原代细胞是理想的,因为它们保留了体内观察到的许多标记。细胞系是不断生长和复制并经历遗传转化的细胞群,具有无限的生长潜力。出于医学和/或研究目的,细胞系已在体外维持。细胞系可以通过非常大量的传代培养进行培养,并且在非常高的传代次数下可能会发生进一步的基因型/表型变化。一般来说,细胞系缺乏体内观察到的许多标记,并且也显示出与原代细胞非常不同的标记谱。

问:ScienCell 如何确认细胞类型?

A. 细胞类型可以通过多种方式确认。细胞形态学非常重要,可以帮助我们识别正确的细胞。此外,我们的质量控制部门使用免疫荧光来确认特定细胞类型的识别标记的存在。免疫荧光也可用于识别污染细胞。

问:我可以获得有关我的批次细胞的哪些捐赠者信息?

答:我们保存所有人类和动物原代细胞的记录。如果您有特定要求(年龄和/或性别),请在订购前联系我们的客户服务部门。

问:我们是否对我们的细胞进行人类白细胞抗原分型?

答:人类白细胞抗原 (HLA) 分型是一种确定一个人的组织与另一个人的组织匹配程度的方法。我们目前不在 ScienCell 研究实验室对此进行测试。

问:我的原代细胞瓶是否 100% 纯?

答:原代细胞永远不会是 100% 纯的,但是,我们会尽力获得尽可能纯的细胞。总是存在污染细胞。

问:我需要多少经验才能开始使用正常原代细胞?

答:强烈推荐具有在无菌条件下使用层流罩工作的经验,并且具有使用其他细胞类型的经验是有利的。如果您是细胞培养的初学者或想建立细胞培养实验室,我们可以为您提供帮助。请联系我们的细胞培养专家。

问:收到后我应该如何处理冷冻保存的细胞?

A. 收到包裹后,立即将冷冻保存的细胞从干冰运输容器转移至液氮中。快速从运输容器转移到液氮中,以防止细胞解冻。请勿将细胞储存在 -20°C 或 -80°C 下,因为这会对细胞造成不可逆转的损坏。

问:当我第一次对冻存细胞进行平板培养时,是否需要离心细胞以去除 DMSO?

答:我们不建议通过离心细胞来去除 DMSO 残留物。离心过程对细胞的危害可能比 DMSO 残留物更大,特别是如果使用不适当的高速。当您铺板细胞时,DMSO 将在培养基中充分稀释。例如,如果将整个冷冻管(1 毫升)细胞放入装有 15 毫升培养基的 T-75 烧瓶中,则 DMSO 浓度将低于 0.67% (v/v)。如果以 5000 - 10,000 个细胞/cm2 铺板细胞,DMSO 的浓度会更低。

问:我应该使用什么类型的培养箱来培养 ScienCell 原代细胞?

我们建议使用 37°C、5% CO 2培养箱培养来自 ScienCell 的所有原代细胞。所有 ScienCell 培养基都需要 5% CO 2来维持细胞的最佳 pH 值。

问:如何用冷冻保存的细胞建立培养物?

A. 注意:详细说明请参阅电池产品表。

  1. 从液氮中取出一小瓶细胞,注意保护手和眼睛。

  2. 将小瓶上的盖子拧松 1/4 圈 10 秒,以释放可能滞留在螺纹中的液氮,然后重新拧紧盖子。

  3. 将冷冻小瓶放入 37°C 水浴中。握住并轻轻旋转小瓶,直至内容物全部解冻。迅速从水浴中取出小瓶,用 70% 乙醇擦拭,然后转移至无菌区。

  4. 小心地取下盖子,不要接触内螺纹。轻轻地将小瓶中的内容物重新悬浮并分配到含有培养基的平衡的聚-L-赖氨酸或纤连蛋白包被的培养容器中(请参阅产品表上列出的具体说明)。

  5. 盖上培养容器的盖子或盖子,轻轻摇动容器以使细胞均匀分布。如有必要,松开盖子以进行气体交换。

  6. 将培养容器放回培养箱(37°C,5% CO2/95% 空气)。

  7. 为了获得最佳结果,培养开始后至少 16 小时内不要扰动培养。第二天刷新培养基以去除残留的 DMSO 和未贴壁的细胞(除非产品表上另有说明)。

问:我应该向细胞培养瓶中添加多少体积的培养基?

A. 建议在 T-25 烧瓶中添加 5 ml 培养基,在 T-75 烧瓶中添加 15 ml 培养基,在 T-150 烧瓶中添加 30 ml 培养基。

问:我应该多久更换一次原代细胞的细胞培养基?

答:请参阅您正在使用的细胞类型的产品表以获取具体说明。一般来说,根据细胞的融合情况,每 2-3 天更换一次培养基。注意:冷冻保存的细胞解冻并铺板后,应在约 16 小时后进行第一次培养基更换,以去除 DMSO 残留和死细胞。

问:我应该在什么汇合处传代细胞?

答:这取决于细胞类型。例如,内皮细胞永远不应该变得太汇合(90%-100%),因为这会促进污染细胞的生长并导致内皮细胞衰老。另一方面,成纤维细胞可以在较高的汇合度(90%-98%)下进行传代培养,并且不会受到较高汇合度的不利影响。一般来说,原代细胞不应该变得太汇合,因为这会导致细胞衰老并促进污染细胞的生长。

问:正常原代细胞的推荐分流比是多少?

答:ScienCell 研究实验室不推荐正常细胞的分流比,因为胰蛋白酶消化后的细胞数量各不相同。我们建议在胰蛋白酶消化后对细胞进行计数,并按照产品表上针对特定细胞类型推荐的接种密度接种细胞。

问:群体倍增和传代次数有什么区别?

答:群体倍增是指培养物中细胞总数增加两倍,最常在指数或“对数"生长阶段提及。术语传代次数是指将细胞群从培养容器中取出并进行传代培养(传代)过程的次数,以保持细胞处于足够低的密度以刺激进一步生长。

问:我可以使用正常原代细胞进行多少次传代?

答:ScienCell 不使用术语“传代"来描述增长潜力,因为每个客户使用不同的分流比。ScienCell 研究实验室在细胞产品表上标出了预期的群体倍增次数。

问:非增殖细胞可以传代培养吗?

A. 非增殖细胞不能进行传代培养,因为它们不增殖。这包括以下细胞类型:神经元、小胶质细胞、巨噬细胞和其他一些细胞类型。产品表将表明细胞是否不增殖。

问:我可以重新冷冻 ScienCell 的正常原代细胞吗?

答:我们不建议客户重新冷冻 ScienCell 的人类和动物原代细胞。

 

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