培养基常见问题

一、如何选用培养基?   选择培养基没有一定标准，有几点建议可供参考：

1. 建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞第一个选的培养基。可以查阅文献，或在购买细胞株时咨询。

2. 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选1640；进行细胞杂交、基因转移实验，可选择IMDM。

3. 用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据实验结果选择最佳培养基，这是最客观的方法，但比较繁琐。

4.ATCC（American Type Culture Collection）收集了绝大多数细胞的详细资料。打开ATCC网页的Cells and hybridomas链接，输入细胞名称就可以搜索ATCC的细胞数据库。数据库中有每一种细胞的详细描述，包括细胞的来源，培养和冻存条件，以及相关文献等资料。

二、液体培养基可以放-20℃保存吗？

不可以！因为在-20℃下，培养基中的盐容易析出，培养基融化后，有的盐可能无法重新溶解，从而导致培养基渗透压降低，培养细胞时，细胞容易破裂而死亡。   

三、新配制的液体培养基能保存多久？

我们建议将新配制的培养基放置于4℃，避光保存尽量在一周内使用完毕。培养基越新鲜越好。

四、培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？

一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

五、培养基中是否须添加抗生素？

除了特殊筛选系统外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。

为防止细菌、真菌污染，可以加入青霉素-链霉素双抗溶液，其培养基中的终浓度为青霉素100U/ml，链霉素为100ug/ml。   

六、为何培养基保存于4℃冰箱中，颜色会偏暗红色，且pH值越来越偏碱性？

培养基保存于4℃冰箱中， 培养基内之CO₂ 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂（通常为phenol red）的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果， 将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时， 可以通入无菌过滤之CO₂， 以调整pH 值。

七、培养液pH是怎样影响细胞生长的？

由于大多数细胞适宜PH值为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对PH值要求也不全部相同，原代细胞培养一般对PH值变动耐受差，无限细胞系耐受力强。 但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更有利于细胞的生长。因此，配制培养用液时可把液体的PH值稍微调的偏酸一些。液体在经过0.1um或0.2um滤膜过滤时，PH值会向上浮动0.2左右。

八、为什么液体培养基1640颜色发黄，是pH值不对吗？

不是。因为配方原因，1640为碱酚红型，其中酚红的浓度只有DMEM的四分之一，所以是因为酚红浓度低，而非PH值低。

九、为什么有客户要求培养基中不含酚红？

研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，细胞培养，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加酚红的培养基。

十、放置在冰箱中的培养基颜色会发生变化，为什么？

培养基保存于4℃冰箱中，培养基内CO₂会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中酸碱指示剂（通常为phenol red）的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱后再用于细胞培养将造成细胞生长停滞或死亡。培养基偏碱时，可以通入无菌过滤的CO₂，以调整pH值。

十一、无血清培养与有血清培养使用的抗生素量一样吗？

当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。因为血清中的蛋白会结合和灭活一些抗生素。而在无血清培养条件下，抗生素不被灭活。

十二、培养基各个成分的作用有哪些？

1.NaHCO₃的作用是什么？

与二氧化碳一起形成缓冲系统，保持培养基PH值稳定。

2.丙酮酸钠的作用是什么？

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。丙酮酸钠的贮存液浓度一般为50mM，-20℃保存，培养基中的终浓度为1mM.

3.加入HEPES有何好处？

培养基中经常用的Buffer system是碳酸氢盐，它可提供营养，但却在生理PH值条件下会降低缓冲能力。而HEPES是一种很强的Buffer，加入HEPES能使细胞培养基在PH7.2-7.6条件下缓冲能力增强。HEPES的贮存液浓度一般为1M，常温保存。培养基中的终浓度为25mM，即5ml 1M的HEPES加入到200ml全部培养基中。

4.酚红的作用是什么？

酚红在培养基中被用来作为PH值指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。

5.谷氨酰胺的作用是什么？

几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有较高的要求。谷氨酰胺脱掉氨基后，可作为培养细胞的能量来源，参与蛋白质的合成和能量代谢。在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。

谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20℃冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4度冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。

试验操作中常配制高浓度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支），分装使用，-20℃保存。使用时，每支1ml的谷氨酰胺加入到99ml全部培养基中，使其终浓度为2mM培养基。