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阳离子脂质/低聚物复合物的制备程序

发布时间: 2024-01-15  点击次数: 152次

基本原理

制备脂质:DNA 复合物的正常程序需要将阳离子脂质悬浮在水性缓冲液中并超声处理以形成小囊泡。将阳离子脂质囊泡与DNA水溶液以脂质:DNA 10:1的重量比混合,并孵育一段时间。在此温育过程中,推测带正电荷的脂质体结合并包覆在 DNA 表面,为 DNA 提供阳离子脂质层,从而促进与细胞膜的相互作用并通过细胞膜转移。对于小 DNA 片段或寡聚体,例如反义 DNA,DNA 颗粒通常比脂质颗粒小得多。在这种情况下,脂质不包被DNA,而是DNA包被脂质体的表面。这将破坏关键的脂质体:细胞表面相互作用并抑制通过膜的转移。为了有效地包被这些小 DNA 颗粒,脂质需要以单体(或小聚集体)的形式呈现给 DNA。这可以通过将脂质溶解在有机溶剂中并将有机物分散在DNA水溶液中或将脂质和DNA一起在有机溶剂中孵育来实现。选择的溶剂是乙醇,因为它既与水混溶,又在悬浮液中残留溶剂时对生物系统无毒。

程序 A(乙醇脂质溶液:低聚物水溶液)

  1. 将阳离子脂质溶解在乙醇中。

    1. 如果脂质样品储存在氯仿中,请使用干燥氮气或氩气蒸发氯仿,并将脂质残留物置于真空系统上 1 小时以除去残留的氯仿。

    2. 将乙醇添加到干燥的脂质残留物中,并使用适度的热量(40-50°C)和超声处理(如果需要)全部溶解。

    3. 调节浓度,使添加到低聚物水溶液中的乙醇脂质溶液的体积为水溶液体积的10%。

  2. 将低聚物溶解在适当体积的水性缓冲液中。

  3. 将乙醇脂质溶液以脂质:低聚物的重量比 10:1 添加到低聚物水溶液中。

    1. 通过涡旋或超声处理全部混合脂质:低聚物悬浮液。

    2. 将悬浮液孵育 5-10 分钟,以形成脂质:低聚物复合物。

    3. 如果不需要残留乙醇,则将悬浮液加热至 40-50°C,并向悬浮液中鼓入氮气,直至除去乙醇。

程序 B(乙醇脂质溶液:乙醇低聚物溶液)

  1. 将阳离子脂质溶解在乙醇中。

    1. 如果脂质样品储存在氯仿中,请使用干燥氮气或氩气蒸发氯仿,并将脂质残留物置于真空系统上 1 小时以除去残留的氯仿。

    2. 将乙醇添加到干燥的脂质残留物中,并使用适度的热量(40-50°C)和超声处理(如果需要)全部溶解。

  2. 将低聚物溶解在合适体积的乙醇中。

  3. 将乙醇溶液按脂质:低聚物 10:1 的重量比混合。

    1. 通过涡旋或超声处理全部混合脂质:低聚物悬浮液。

    2. 将悬浮液孵育 5-10 分钟,以形成脂质:低聚物复合物。

    3. 使用干燥氮气、氩气、旋转蒸发器等蒸发乙醇,并在真空系统上干燥脂质残留物1小时以除去残余乙醇。

  4. 将脂质:低聚物复合物重悬于水性缓冲液中并超声处理以分散。





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