欢迎光临北京和一生物科技有限公司网站!
诚信促进发展,实力铸就品牌
服务热线:

18813176065

产品分类

Product category

技术文章 / article 您的位置:网站首页 > 技术文章 > 通过挤压制备大的单层囊泡 (LUVET)

通过挤压制备大的单层囊泡 (LUVET)

发布时间: 2024-01-15  点击次数: 114次

 

  1. 通过冻干或蒸发制备干脂质混合物

  2. 将挤出机支架/加热块放在热板上。将温度计插入加热块中提供的孔中。打开热板,并使其达到所需的温度。让加热块的温度达到所需值(大约 15 分钟)。

  3. 使用合适的缓冲液水合脂质混合物 >30 分钟。在水合和挤出过程中,脂质悬浮液应保持在脂质的相变温度以上。为了提高水溶性化合物的截留效率,可以通过将样品瓶交替放置在干冰浴和温水浴中,使水合脂质悬浮液经历3-5次冷冻/解冻循环。

  4. 一旦样品全部水合,将样品装入其中一支气密注射器中,并小心地放入微型挤出机的一端。注意:为了减少死体积,请将装满缓冲液的注射器穿过挤出机来预润湿挤出机部件;丢弃缓冲区。新注射器可能有紧密的配合部件;为了便于挤出,在将柱塞插入针筒之前,用缓冲剂预先润湿注射器针筒和柱塞。

  5. 将空的气密注射器放入微型挤出机的另一端。确保空注射器柱塞设置为零;当脂质通过膜挤出时,注射器将自动填充。

  6. 在将组装好的挤出机设备放入加热块之前,检查加热块的温度。温度必须低于80℃,否则注射器会损坏。注意:挤出机装置在插入加热块之前必须全部组装,否则会损坏。

     

     

     

     

     

     

     

     

     

  7. 将全部组装好的挤出机设备插入挤出机支架。插入六角螺母,使任何两个相对的顶点落在垂直平面内。使用摇臂夹将注射器与加热块保持良好的热接触。注意:挤出机装置在插入加热块之前必须全部组装,否则会损坏。

     

     

     

     

     

     

     

     

     

  8. 让脂质悬浮液的温度与加热块的温度平衡(大约 5-10 分钟)。

  9. 轻轻推动已填充注射器的柱塞,直至脂质溶液全部转移到备用注射器中。

  10. 轻轻推动备用注射器的柱塞,将溶液转移回原来的注射器。

  11. 重复步骤 9 和 10 至少 4 次(总共 10 次穿过膜)。一般来说,通过膜的次数越多,脂质溶液变得越均匀。

  12. 最终的挤出物应填充备用注射器。这是为了减少被较大颗粒或异物污染的机会。

  13. 脂质悬浮液应开始澄清,产生稍微浑浊的透明溶液。雾度是由于悬浮液中残留的大颗粒引起的光散射造成的。

  14. 最终挤出后,从加热块上取下微型挤出机。

  15. 从挤出机中取出已填充的注射器,并将脂质溶液注入干净的样品瓶中。重要提示:取出注射器时,请将注射器直接从挤出机中拉出;以一定角度取出可能会导致注射器破裂。

  16. 实验期间将囊泡制剂储存在脂质的转变温度以上。不使用时,将囊泡溶液储存在 4°C 下。不要冻结。在 4°C 下储存时,囊泡溶液在水性介质中不能稳定超过 3-4 天。在较高温度和 pH 8 下储存囊泡溶液可能会缩短囊泡悬浮液的寿命。

  17. 在使用新的脂质制剂之前全部清洁仪器。