欢迎光临北京和一生物科技有限公司网站!
诚信促进发展,实力铸就品牌
服务热线:

18813176065

产品分类

Product category

技术文章 / article 您的位置:网站首页 > 技术文章 > EDTA是怎样分离ATCC细胞的?

EDTA是怎样分离ATCC细胞的?

发布时间: 2024-01-17  点击次数: 178次
   EDTA是一种常用的螯合剂,可以与金属离子结合形成稳定的络合物。在细胞分离中,EDTA常常被用来去除细胞表面的蛋白质和多糖等物质,从而使得细胞更容易被分离出来。本文将介绍EDTA是怎样分离ATCC细胞的。
  ATCC细胞是指由ATCC提供的已经经过鉴定和保种的细胞株,广泛应用于生物学、医学等领域的研究和实验中。在使用ATCC细胞进行实验时,通常需要将细胞从培养基中分离出来。由于细胞表面存在许多蛋白质和多糖等物质,这些物质会与培养基中的其他成分相互作用,导致细胞难以被分离出来。因此,需要使用一些特殊的方法来去除这些物质,以便更好地分离细胞。
  EDTA可以通过与细胞表面的钙离子结合,形成稳定的络合物,从而使细胞表面的蛋白质和多糖等物质失去活性。具体来说,当EDTA与钙离子结合后,会形成一个五元环结构的螯合物,这个螯合物可以与细胞表面的蛋白质和多糖等物质结合,从而使其失去活性。这样就可以通过离心等方法将细胞从培养基中分离出来。
  EDTA分离ATCC细胞的步骤:
  1.将细胞培养在含有10%FBS的培养基中,直到它们达到80-90%的密度。
  2.用PBS洗涤一次细胞,以去除残留的培养基和其他杂质。
  3.向细胞中加入1-2毫升的0.25%胰蛋白酶-EDTA混合液(每毫升含0.25克胰蛋白酶和10毫克EDTA),并在室温下孵育5-10分钟。
  4.轻轻摇晃培养瓶使胰蛋白酶-EDTA混合液均匀分布到整个培养瓶中。
  5.在显微镜下观察细胞是否已经从培养瓶壁上脱落下来。如果还有残留的细胞,可以再次加入少量的胰蛋白酶-EDTA混合液并继续孵育几分钟。
  6.用移液器将消化后的细胞悬液转移到离心管中,并用PBS稀释至适当浓度。
  7.在室温下离心5分钟,使细胞沉淀下来。然后用吸管将上清液吸出并将沉淀重新悬浮在适量的PBS中即可。