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CUBIC组织透明化试剂——应用实例更新

发布时间: 2024-01-30  点击次数: 186次

CUBIC Trial Kit是一款用于透明化技术CUBIC(Clear, Unobstructed Brain/Body Imaging Cocktails and Computational analysis)的试剂盒。

该方法由上田泰己教授和洲崎悦生教授等人开发。

只需将组织浸入试剂盒包含的溶液中,即可对小鼠大脑和全组织、灵长类的全脑和甲壳类的全组织进行透明化处理和折射率调整。

该方法有望应用于病理学研究和单细胞水平中的观察。

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数据提供:

国立研究开发法人理化学研究所上田泰己教授、洲崎悦生教授


 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

◆CUBIC特点

● 操作简单(只需浸入溶液)

● 可透明化整个器官

● 小鼠全脑透明化只需两周


 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

可进行透明化的组织

小鼠大脑和全组织,灵长类全脑,鱼类、甲壳类、甲虫等的全组织,骨骼(需进行脱钙处理)


CUBIC Trial Kit试剂盒组成

1. ScaleCUBIC-1 Solution——250 mL x 1支

2. ScaleCUBIC-2 Solution——250 mL x 1支

3. Mounting Solution-1——40 mL x 1支

4. Mounting Solution-2——40 mL x 1支


 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

透明化处理需准备

▼ 试剂:

1. CUBIC Trial Kit

2. 多聚甲醛(产品编号:160-16061)

3. PBS×1(产品编号:164-25511)

▼ 实验用具:

1. 5 mL/15 mL/30 mL/50 mL锥形管(配合样品使用)

2. 摇床

3. 用于观察CUBIC透明化样品的荧光显微镜※和推荐物镜※※

※共聚焦显微镜、双光子显微镜、光片显微镜

※※与折射率 (RI=1.49)相匹配的物镜。

建议在使用之前咨询显微镜制造商。


 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

◆CUBIC实验方案事例

透明化实验方案示例(完整器官)

请注意,组织透明化实验方案中所用试剂用量、处理时间需根据样品尺寸进行调整。此外,建议在灌注固定后,取出并重新固定样品。

各个步骤中使用的试剂量约为12-15 mL,清洗时建议使用试剂量的5-10倍。

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*每2天更换新溶液

**建议以2 : 8、3:7的比例混合 (RI = ~1.49) 试剂盒中的Mouting Solution 1 和 2 使用


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图1.使用Scale CUBIC Solution透明化前后小鼠所有器官的案例

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

免疫组织染色实验方案示例

脑组织块的免疫染色案例,详细实验方案请见参考文献(1)

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*每2天更换新溶液

**分别用以下溶液稀释抗体

一抗:0.1% (v/v) Triton X-100, 0.5% (w/v) bovine serum albumin, 0.01% (w/v) sodium azide in PBS

二抗:0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1% (w/v) bovine serum albumin, 0.01% (w/v) sodium azide in PBS

***建议以2 : 8、3:7的比例混合 (RI = ~1.49) 试剂盒中的Mouting Solution 1 和 2 使用。

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图2.使用CUBIC处理的脑组织块经三维免疫染色后单光子显微镜成像