CUBIC Trial Kit是一款用于透明化技术CUBIC(Clear, Unobstructed Brain/Body Imaging Cocktails and Computational analysis)的试剂盒。
该方法由上田泰己教授和洲崎悦生教授等人开发。
只需将组织浸入试剂盒包含的溶液中,即可对小鼠大脑和全组织、灵长类的全脑和甲壳类的全组织进行透明化处理和折射率调整。
该方法有望应用于病理学研究和单细胞水平中的观察。
数据提供:
国立研究开发法人理化学研究所上田泰己教授、洲崎悦生教授
◆CUBIC特点
● 操作简单(只需浸入溶液)
● 可透明化整个器官
● 小鼠全脑透明化只需两周
可进行透明化的组织
小鼠大脑和全组织,灵长类全脑,鱼类、甲壳类、甲虫等的全组织,骨骼(需进行脱钙处理)
CUBIC Trial Kit试剂盒组成
1. ScaleCUBIC-1 Solution——250 mL x 1支
2. ScaleCUBIC-2 Solution——250 mL x 1支
3. Mounting Solution-1——40 mL x 1支
4. Mounting Solution-2——40 mL x 1支
透明化处理需准备
▼ 试剂:
1. CUBIC Trial Kit
2. 多聚甲醛(产品编号:160-16061)
3. PBS×1(产品编号:164-25511)
▼ 实验用具:
1. 5 mL/15 mL/30 mL/50 mL锥形管(配合样品使用)
2. 摇床
3. 用于观察CUBIC透明化样品的荧光显微镜※和推荐物镜※※
※共聚焦显微镜、双光子显微镜、光片显微镜
※※与折射率 (RI=1.49)相匹配的物镜。
建议在使用之前咨询显微镜制造商。
◆CUBIC实验方案事例
透明化实验方案示例(完整器官)
请注意,组织透明化实验方案中所用试剂用量、处理时间需根据样品尺寸进行调整。此外,建议在灌注固定后,取出并重新固定样品。
各个步骤中使用的试剂量约为12-15 mL,清洗时建议使用试剂量的5-10倍。
*每2天更换新溶液
**建议以2 : 8、3:7的比例混合 (RI = ~1.49) 试剂盒中的Mouting Solution 1 和 2 使用
免疫组织染色实验方案示例
脑组织块的免疫染色案例,详细实验方案请见参考文献(1)
*每2天更换新溶液
**分别用以下溶液稀释抗体
一抗:0.1% (v/v) Triton X-100, 0.5% (w/v) bovine serum albumin, 0.01% (w/v) sodium azide in PBS
二抗:0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1% (w/v) bovine serum albumin, 0.01% (w/v) sodium azide in PBS
***建议以2 : 8、3:7的比例混合 (RI = ~1.49) 试剂盒中的Mouting Solution 1 和 2 使用。