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ATCC细胞如何进行传代培养操作?

发布时间: 2021-02-02  点击次数: 58次
   ATCC细胞使用切忌与手接触,要用洁净的药勺,量筒或滴管取用,不允许用同一种工具同时连续取用多种试剂。取完一种试剂后,应将工具洗净(药勺要擦干)后,才可取用另一种试剂。
  ATCC细胞的传代培养操作步骤:
  1.吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液。
  2.向瓶内加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆盖培养瓶底为宜。
  3.置37℃孵箱或室温(25℃)下进行消化,2-5min后把培养瓶放在倒置显微镜下进行观察,当发现胞质回缩、细胞间隙增大后,应立即中止消化。
  4.吸出消化液,向瓶内加入Hanks液少量,轻轻转动培养瓶,把残留消化液冲掉,然后再加培养液。如果仅使用胰蛋白酶消化,在吸除胰蛋白液后,可直接加入少量含血清的培养液,终止消化。
  5.使用弯头吸管,吸取瓶内培养液,按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔,以防用力过猛损伤细胞。
  6.用计数板计数后,分别接种于新的培养瓶中,置CO2培养箱中进行培养。
  7.细胞培养换液时间应根据细胞生长的状态和实验要求来确定。一般2-3d后应换一次生长液。待细胞铺满器皿底面,即可使用;也可继续传代扩大培养或换成维持液。
  相关注意事项:
  1.掌握好细胞消化的时间,消化时间过短时,细胞不宜从瓶壁脱落,过长的消化会导致细胞脱落、损伤。
  2.掌握好消化浓度,当消化液浓度过高时,消化时间应缩短,过低时细胞消化时间相对延长。

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