欢迎光临北京和一生物科技有限公司网站!
诚信促进发展,实力铸就品牌
服务热线:

18813176065

产品分类

Product category

技术文章 / article 您的位置:网站首页 > 技术文章 > 如何摆脱qpcr苦恼,得到更好的结果

如何摆脱qpcr苦恼,得到更好的结果

发布时间: 2022-03-03  点击次数: 166次

什么是荧光定量PCR

指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个
PCR进程,使每一个循环变得“可见",最后通过Ct值和标准曲线对样品中的DNA(or cDNA)的起始浓度进行定量的方法。

定量PCR原理?

与传统PCR一样,反应在温度模块里循环进行;理论上每经过一个循环目的基因的数量都会增加一倍;每个循环结束后,定量PCR仪器通过不同的滤光片记录荧光信号;在扩增过程中,荧光信号随着PCR产物的增加而增强。

 

定量PCR体系?

普通的PCR体系;模板,引物,dNTPsbufferTaq酶;加入各种类型的荧光染料。

在做Real time PCR时,对于SYBR Green I染料法和Taqman探针法都可以,但是二者有区别。SYBR Green I染料法是利用SYBR Green I结合双链DNA来检测PCR产物,可用于监测任意双链DNA序列的扩增,但是必须考虑非特异性扩增。因成本相对低,是目前较常用的)。但是由于SYBRGreen I可以与所有的双链DNA结合,包括非特异性的双链DNA序列,因此可能会产生假阳性信号。

1.png

图1:SYBR染料法原理图


Taqman探针法使用荧光探针检测PCR扩增过程中产生的特异PCR产物:特异性荧光信号的产生,需要探针与目标序列进行特异性的杂交;探针可以标记不同的报告基团,因此可以在一个反应管中进行二条序列扩增完整的探针。5′端荧光基团吸收能量后将能量转移给临近的3′端荧光淬灭基团(发生荧光共振能量转移);退火,探针与模板结合,引物在聚合酶作用下进行延伸反应,遇到探针时发挥3-5′外切酶活性将探针切碎到反应体系中;报告基团与淬灭基团距离变大,在激发光的作用下发荧光。实验结果重复性好,价格高。


图2:TaqMan探针法原理图


说了这么多,不知道小伙伴们对qPCR的理解是不是清晰多了呢?qPCR作为一种简单便捷的定量技术,应该是小伙伴们常用的技术了。虽然听起来简单但做起来却没有想象的那么简单,事实上,实验室做一个样本检测QPCR需要1~2个小时,这个时候不仅试剂盒重要,检测能力也很重要,希望这篇文章能帮助小伙伴们对QPCR有一个清晰的了解



联系我们

contact us

咨询电话

18813176065(V同号)

扫一扫,关注我们

返回顶部