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ATCC细胞观察培养时的主要事项说明

发布时间: 2022-03-10  点击次数: 491次
   ATCC细胞转化试验有形态计数法、MTT法和同位素法三种。MTT法即四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法,MTT是一种噻唑盐,化学名3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑,水溶液为黄橙色。小鼠脾细胞受到ConA作用后发生增殖活化,其胞内线粒体琥珀酸脱氢酶活性相应升高,MTT作为其底物参与反应,形成蓝色的甲臜(Formazan)颗粒沉积于细胞内或细胞周围,经盐酸─异丙醇溶解后为蓝色溶液,可用酶标测定仪测定细胞培养物的OD值,测定波长570nm,根据OD值的大小计算反应体系中细胞增殖程度。
  ATCC细胞观察培养时的主要事项说明:
  1.肉眼观察细胞培养基颜色,再借助显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张),这样做可方便后期的对比。
  2.用75%的酒精消毒(75%的酒精的水要经过杀菌处理)。
  3.严格按照在无菌环境下操作的原则,打开细胞培养瓶。
  4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(要换新的培养基培养细胞)。
  5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
  6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
  7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。