设备及材料

• 1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺

• 阳离子脂质

• 氯仿

• 蒸馏水

• 缓冲

• 带聚四氟乙烯内衬的玻璃瓶

• 玻璃注射器

• 氮气或氩气

• 真空系统

• 0.22μm 过滤器（可选）

程序

1. 将每种脂质成分（例如，DOTAP/DOPE）溶解在氯仿中至方便的工作浓度（1-10mg/mL）。

2. 使用玻璃注射器将所需量的每种成分等分到玻璃瓶中。有关处理脂质有机溶液的更多信息。

3. 全部混合玻璃瓶中的成分。

4. 使用氮气或氩气流小心地蒸发氯仿（在充分通风的情况下）。

5. 将脂质残留物放在真空泵上 10-15 分钟，以除去任何残留的有机溶剂。

6. 从真空泵中取出小瓶，并立即以最终脂质浓度的两倍悬浮在蒸馏水中。

7. 将脂质分散体超声处理至澄清（2-5 分钟）。

8. 添加等体积的缓冲液（例如，308mM NaCl、40mM Hepes、pH7.4），并进一步超声处理 2 分钟。

9. 溶液可通过 0.22μm 过滤器进行灭菌。

脂质/DNA 混合物的制备

1. 将阳离子脂质分散体与 DNA（每 10μg 脂质 1μg）混合在合适的容器中。

2. 将脂质/DNA 混合物孵育 5 分钟。在室温下。

3. 5 分钟后，混合物即可用于转染细胞。

细胞转染

1. 用 HEPES 缓冲盐水洗涤细胞单层两次。

2. 将细胞与脂质/DNA 混合物在 HEPES 缓冲盐水（每 100 mm 培养皿 3 ml 混合物）中于 37°C 孵育 90 分钟。

3. 孵育期结束后，根据需要更换培养基或补充。

4. 将细胞培养所需的时间并收获。

笔记

• DOPE:阳离子脂质的常见摩尔比为3:1和1:1。在某些情况下，全部由阳离子脂质组成的脂质系统已被用于转染细胞。

• 所引用的缓冲系统旨在用于体外使用，并不表明该系统可能适合体内使用。

参考

• Leventis, R. 和 Silvius, JR (1990)。生物化学。生物物理学。Acta 1023：124-132。

 Avanti   品牌

1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺    850725P

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