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creative-enzymes 荧光酶的测定

发布时间: 2024-02-29  点击次数: 352次

 


Creative Enzymes提供高质量的生物分析服务和合同研究,专门从事酶活性分析,满足制药、生物技术和诊断行业客户的需求。多年来,Creative Enzymes一直是荧光酶检测领域经验丰富的公司。我们的测量能力广泛,涵盖各种酶,包括氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂解酶、异构酶和连接酶。在解决具体问题、优化操作以及酶活性测量方法开发的过程中,我们始终与客户密切合作。

荧光是一种发射现象,其中吸收辐射的波长始终低于发射(荧光)波长(能量较高)。荧光酶测定利用产物底物荧光光谱的差异来测量酶反应(图 1)。吸收光后,基态 (S 0 ) 的荧光团被激发到更高能量的单线态水平。在皮秒时间尺度内发生的快速热化使受激分子处于第一激发态 (S 1 )的很低振动能级。在系统发射光子后衰减回到基态之前,这种激发单线态可以保持很短的时间(纳秒量级)。由于这种激发到基态跃迁的能量通常比激发过程的能量低,因此发射的波长通常比激发的波长更长。这种波长差异称为斯托克斯位移。实际上,所有荧光数据都可以通过五个参数之一来描述:激发光谱、发射光谱、量子产率、荧光寿命以及发射的各向异性或偏振。

Perrin-Jablonski 图。 S0 是基态,而 S1 和 S2 是电子激发态。图 1: Perrin-Jablonski 图。S 0是基态,而S 1和S 2是电子激发态。
参考文献: Eccleston JF,Hutchinson JP,Jameson D M。药物化学进展,2005,43:19-48。

荧光测定广泛用于确定酶反应的动力学机制,也用于配置高通量筛选的动力学测定。要使用基于荧光的测定进行测量,反应需要从非荧光底物形成荧光产物,反之亦然。第一种情况的一个例子是在水解酶测定中使用非荧光试卤灵丁酯作为底物,其中酯键的酶裂解产生高荧光试卤灵。后者的一个例子是涉及将 NAD(P)H 氧化为非荧光 NAD(P) +的任何酶反应。荧光共振能量转移 (FRET) 也可用于酶测定,其中酶促反应改变底物中两个荧光团的距离或方向,从而改变观察到的供体或受体的荧光强度。

荧光酶测定通常比分光光度测定灵敏得多,但可能会受到杂质造成的干扰以及许多荧光化合物在光照下的不稳定性。在当前阶段,对通常可从人类患者获得的组织、细胞或液体的小样本进行诊断酶评估的数量不断增加,这些测定的高灵敏度特别有价值。荧光测定还特别适合反应混合物的小型化。通过这种方式,可以进一步大幅提高灵敏度,从而减少对酶和荧光底物样品的需求。随着非常昂贵或稀缺的荧光底物的出现,后者的保护变得重要。

凭借最新的知识和先进的仪器,Creative Enzymes有信心为客户提供可靠的荧光酶检测,提供所有类型酶活性水平的量化。通过不断追求好的服务,Creative Enzymes赢得了数以万计客户的信任。总体而言,Creative Enzymes致力于实现最高的客户满意度,并不断改进服务和质量管理。

 

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