CST测试ELISA试剂盒的可靠性

发布时间： 2024-03-22　　点击次数： 69次

即用型 ELISA 试剂盒无需科研工作者花费时间摸索优化条件，因此可以简化研发的工作流程。其中至关重要的是，科研工作者选择的 ELISA 试剂盒需要具有批次间高度可重复性，才能得到如预期的项目进展。如果您的实验持续很长，但所使用的 ELISA 试剂盒批号中途变更了，那您需要确保新、老批次的表现是一致的、产生相似的信号/空白比，且任何批次间差异需在可接受的变异系数 (%CV) 值范围内。

抗体作为 ELISA 试剂盒的核心组分，与可重复性危机密切相关，即人们日益认识到的许多科学实验无法重复。确保实验可重复，需要研究人员谨慎选择产品，并且要求抗体制造商确保高质量、经过很严格验证的产品供科研工作者使用。至关重要的是，抗体应对其靶标表现出高度特异性，并应在其所适用的应用中都经过严格验证。

在 CST，开发和上市销售抗体时，我们坚持遵守 Hallmarks of Antibody Validation^™，以确保您获得自己可以信任的数据。对于不同的抗体，会选择这六种补充性验证策略中合适的方法对抗体进行严格验证，进而确保抗体在任何测定法中的特异性、灵敏度和功能性符合要求。这意味着，当选择 CST^® 抗体时，该抗体的性能保证在我们公司产品保证范围内。

我们的抗体是即用型 FastScan^™、PathScan^® 和 PathScan^® Rapid Protocol (RP) ELISA 试剂盒的基础，所有这些试剂盒均使用双抗夹心法，与直接和间接 ELISA 相比，靶标特异性更加优异。在设计和生产 ELISA 试剂盒时，通过确定最佳抗体对并预先进行所有试剂盒的开发和验证，来确保您项目全程数据的质量。

浏览 ELISA 试剂盒

作为产品科学家，在 CST 工作的6年间，我的大部分职责是测试公司 ELISA 试剂盒的批间差异，以确保批次间的一致性。科学可重复性是 CST 的核心价值观，这在我们严格验证标准中已体现。最终，我们希望无论客户收到哪一批次的试剂盒，他们的研究可以不中断，且结果可信任。通过按照公司既定的标准操作规程 (SOP) 生产每个批次的ELISA 试剂盒，可确保研究人员获得的结果具有一致性、可靠性。

ELISA 试剂盒批次测试要求

在向研究人员提供任一新批次 ELISA 试剂盒之前，我们都进行一系列全面测试。这些测试起到确认新批次对目的靶标具有高度特异性（低背景信号）、与当前批次相当的灵敏度和具有产生宽动态范围灵敏度曲线的能力。

我们会进行如下测试：

有阳性对照和阴性对照的测试

根据 ELISA，用于验证目的的对照可以是生物学相关的样品或靶标蛋白内源水平已知（高表达和低表达）的样品。通过同时用老批次和新批次的 ELISA 试剂盒生成不同蛋白质浓度下吸光度信号变化的平行滴定曲线，我们可以确认各数据集间的关联。由于每个模型系统都不同，我们建议客户参考我们的滴定曲线来确定自己的样品上样蛋白质浓度。

由于我们的 FastScan、PathScan 和 PathScan RP ELISA 试剂盒是对相对（而非绝对）定量进行验证，因此它们不包含标准品。相反，我们建议样品可依据蛋白质含量或细胞数进行标准化。不过，FastScan 试剂盒会提供冻干的阳性对照，以验证分析性能。

光密度 (OD) 信号阈值

对于待验证的 ELISA 试剂盒批次，阳性对照样品必须具有大于 1.5 的绝对光密度 (OD) 值，而空白样品的信号阈值应低于 0.3。在测试我们的 PTM 特异性 ELISA 试剂盒时，我们还设置了适当的诱导阈值，以确保磷酸化对照样品的信号显著高于阴性非磷酸化对照样品的信号。

此外，相对于最高滴定点，新批次ELISA 试剂盒的信号/空白比必须大于5.0。该值必须落入类似于现有批次的范围内，以便新批次符合我们的可重复性标准。

PathScan^® Phospho-SMAD2 (Ser465/467)/SMAD3 (Ser423/425) Sandwich ELISA Kit #12001 的信号/空白比数据摘要
浓度 (mg/ml)	#12001 第 34 批	#12001 第 35 批
0.075	18.3	16.9
0.0375	11.9	11.9
0.01875	7.8	7.7
0.009375	4.8	4.8

变异系数百分比 (%CV) 值

验证新 ELISA 试剂盒批次的另一个关键参数是 %CV。为了生成该值，我们对新批次中随机选择的三个板条运行滴定曲线，以确定每个重复的平均值 (μ) 和标准差 (SD，σ)，然后应用以下公式：

%CV = (σ / µ) x 100

对于待放行的新批次，现有批次与新批次之间的分析间差异必须小于 15%。

PathScan^® Phospho-SMAD2 (Ser465/467)/SMAD3 (Ser423/425) Sandwich ELISA Kit #12001 的变异系数百分比 (%CV) 数据摘要
浓度 (mg/ml)	#12001 第 34 批	#12001 第 35 批	标准差	%CV
0.075	2.734	3.115	0.040	1.28
0.0375	1.781	2.201	0.030	1.34
0.01875	1.166	1.425	0.028	1.93
0.009375	0.710	0.894	0.015	1.66

为了确保我们的 ELISA 试剂盒随时间推移性能保持一致，同时没有信号的衰减，我们通常在保质期过半时进行质量控制 (QC) 跟进测试。

为您的下一次 ELISA 实验提供高质量结果

即用型 ELISA 试剂盒可以为您的研究带来许多益处，前提是要从可靠的制造商购买这些产品。您的测定结果的与使用的抗体高度相关。在 CST，我们使用经严格验证的高质量抗体作为 FastScan、PathScan 和 PathScan RP ELISA 试剂盒的基础，每个新批次在可供给客户之前都经过全面测试。通过核实每个新批次的 ELISA 试剂盒与先前的具有相当的性能，我们旨在确保您的项目按计划进行，而无任何计划外的中断。

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