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ATCC细胞复苏和培养的有关说明

发布时间: 2021-01-11  点击次数: 165次
   ATCC细胞在冻存操作时需使用手套,工作服和防护面具以避免任何事故发生。检查包装,查看是否有任何破裂或渗漏。冻存的ATCC细胞株应处于固体状。将冻存的ATCC细胞株从有干冰的包装中取出,立即复苏培养,或迅速转移放置在液氮罐存储。
  ATCC细胞的复苏和培养操作:
  1.准备好细胞培养皿或细胞培养瓶,及产品说明推荐的相应细胞培养基。并在37℃水浴中预先温热细胞培养基。
  2.小心取出装有细胞的冻存管,保持管盖拧紧,将冻存管盖以下的部分置于37℃水浴中并轻微的晃动以帮助解冻。解冻过程应该尽快,大约短于2分钟或待后一块小冰晶体刚融化,就应将细胞冻存管取出水浴。
  3.在从水浴中取出的细胞冻存管表面喷洒70%乙醇配制的消毒剂,用无菌纸巾或纱布试干。之后的操作步骤都应该遵循在无菌条件下生物安全柜中严格操作。
  4.小心拧开冻存管的顶部,将管内容物用1ml移液枪转移到含9毫升培养基的无菌离心管中。离心5到7分钟(125×g),小心吸去上清液以去除抗冻剂(二甲基亚砜),避免丢失细胞沉淀。将细胞沉淀重悬于配好的完全培养基中。将细胞悬液转移到培养容器,轻轻摇晃使细胞均匀的分布。生长较慢的细胞株可重悬于5-8ml培养基并转移到T25培养瓶。生长较快的细胞株可重悬于12-20ml培养基并转移到T75培养瓶。
  5.将细胞培养容器置于细胞培养箱,在温度37℃,二氧化碳浓度5%的培养条件下进行孵育。细胞培养24小时后应在显微镜下观察细胞形态和生长状况。
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