Gibco血清的培养基配制及前处理说明

　　一、合成培养基的配制

　　1.根据细胞目录中的说明，按下表选择合适品牌及货号的培养基干粉，用适量超纯水充分溶解。

　　2.按要求添加碳酸氢钠、谷氨酸钠、HEPES等，充分搅拌使之溶解。

　　3.调pH至7.2左右。

　　4.加水至最终体积。

　　5.在超净台中对溶液进行滤过除菌，分装入250 mL或500 mL玻璃瓶中，用翻帽塞塞紧瓶口。

　　6.瓶口封好，4℃冰箱贮存。

　　二、生长培养基的配制

　　除无血清培养之外，各种合成培养基在使用前需加入一定量的血清和抗菌素。

　　培养基分装成小瓶(100-200 mL)以便使用，翻帽塞塞紧瓶口。

　　按如下比例配制：基本培养基占80%-90%，血清占10%-20%。按1%体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U/mL和100μ/mL。

　　三、Gibco血清的处理

　　市场上出售的血清一般做了灭菌处理，但在使用前还应做热灭活处理，即通过加热的方法破坏补体(近来也有观点认为热灭活处理是不必要的)。

　　1.将血清加热至56℃并保持30 min，其间要不时轻轻晃动，使受热均匀，防止沉淀析出。

　　2.处理后的血清贮存于4℃。

　　3.血清在使用前最好进行筛选以掌握血清的质量。