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如何检测ATCC细胞增殖情况呢?

发布时间: 2021-06-10  点击次数: 25次
   直接计数法是简单的检测ATCC细胞生长的方法。计数细胞一般利用台盼蓝(台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高,可使染料进入细胞内而使细胞着色)。因此,镜下未染色细胞认为是活细胞,而染色细胞认为是死亡细胞。
  检测DNA合成法是目前检测ATCC细胞增殖准确可靠的方法,常用的方法有:
  1.3H-胸腺嘧啶核苷渗入法(3H-TdR)
  胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA合成的前体物,处于S期的细胞不断地摄取TdR用以合成DNA。3H-TdR掺入法是将被放射性标记的3H-TdR掺入DNA合成期的细胞,细胞内3H-TdR掺入量的多少可客观反映细胞复制DNA能力的大小,从而问接了解细胞增殖情况。通过检测H放射活性即可反映DNA含量。
  2.BrdU检测法
  BrdU中文全名为5-溴脱氧尿嘧啶核苷,为胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期)掺入,而后利用抗BrdU的抗体耦联不同的酶,加入不同发光特性的底物,然后再通过比色法、化学发光检测或荧光信号检测底物强度等步骤,反映BrdU的掺入量。该方法不需要再和放射性物质打交道。
  3.EdU检测法
  BrdU虽然解决了接触同位素的问题,但该方法需要变性DNA后才能与抗体结合,但这就破坏了DNA双链结构,对某些后续或同时进行的试验,如其他染料的结合染色有影响。现在有一种新的检测方法能避免这种情况的发生-EdU检测。EdU(5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷)也是一种胸腺嘧啶核苷类似物,但其连有的炔羟基团在天然化合物中很少见,在细胞增殖时能够插入正在复制的DNA分子中,基于EdU与染料的共轭反应可以进行高效快速的细胞增殖检测分析,可以有效地检测处于S期的细胞百分数。与传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法相比,更简单、快速、准确。

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